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動物細(xì)胞的幾種轉(zhuǎn)染方法對比

  脂質(zhì)體法采用陽離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染體,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,不但可以轉(zhuǎn)染其他化學(xué)方法不易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,而且還能轉(zhuǎn)染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質(zhì)。此外,脂質(zhì)體體外轉(zhuǎn)染同時適用于瞬時表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá),與以往不同的是脂質(zhì)體還可以介導(dǎo)DNA和RNA轉(zhuǎn)入動物和人的體內(nèi)用于基因治療。
  人工合成的陽離子脂質(zhì)體和帶負(fù)電荷的核酸結(jié)合后形成復(fù)合物,當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時被內(nèi)吞成為內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),隨后DNA復(fù)合物被釋放進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi).利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性,因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題。
  電穿孔法常用來轉(zhuǎn)染如植物原生質(zhì)體這樣的常規(guī)方法不容易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。電穿孔靠脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔而將核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。導(dǎo)入的效率與脈沖的強(qiáng)度和持續(xù)時間有關(guān)系,基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),這種方法適用于培養(yǎng)的細(xì)胞核在體的細(xì)胞。
  葡聚糖是較早應(yīng)用哺乳動物細(xì)胞(小鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞各類傳代細(xì)胞等)轉(zhuǎn)染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負(fù)電的核酸結(jié)合后接近細(xì)胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染成功地用用于瞬時表達(dá)的研究,但用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染卻不是十分可靠。
  磷酸鈣共沉淀法因為試劑易取得、價格便宜而被廣泛用于瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的研究,先將DNA和CaCl2混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉淀,較后把含有沉淀的混懸液加到培養(yǎng)的細(xì)胞上,通過細(xì)胞胞膜的內(nèi)吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細(xì)胞內(nèi)的核酸酶活性而保護(hù)外源DNA免受降解。
  磷酸鈣法  穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)   不適用于原代細(xì)胞,操作簡便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用;
  陽離子脂質(zhì)體法  穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)所有細(xì)胞   適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大;
  電穿孔法   穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)所有細(xì)胞    適用性廣但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大;
  DEAE-右旋糖苷法   瞬轉(zhuǎn)  相對簡便、結(jié)果可重復(fù),但對細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時需除血清;
  病毒介導(dǎo)法    穩(wěn)轉(zhuǎn)   可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等;
  腺病毒  瞬時轉(zhuǎn)染特定宿主     可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞需考慮安全因素;
  Biolistic顆粒傳遞法瞬轉(zhuǎn)  可用于人的表皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞,淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞;
  顯微注射法  穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)   轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞。
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